四環素類抗生素的測定方法主要包括微生物抑制法、酶聯免疫法、分光光度法、毛細管電泳色譜法、薄層色譜法、高效液相色譜法、液相色譜-質譜法等。

  樣品經過提取和凈化后，四環素類抗生素可通過薄層色譜或液相色譜進行分離，再采用分光光度、熒光或質譜檢測系統進行定量測定。

  微生物法是一種傳統的測定四環素類化合物和其他抗生素的分析方法。微生物通常對四環素類抗生素具有固有的敏感性。操作簡便，價格低廉，不需要精密儀器和復雜的樣品前處理過程，因而適合大量樣品的篩選。

  間接酶聯免疫法可用來檢測牛奶中的四環素類抗生素。檢測限可達5 ng/g由于該方法所采用抗體與金霉素有強烈的交叉反應活性，因此，該法雖然不是用來檢測四環素類的，但對于金霉素的檢測限也低達5 ng/g。