市場上近幾年涌現出不少自動細胞計數器。這種儀器利用光學顯微鏡技術，但帶來了更高的準確性、重復性，并將這一單調的工作自動化。樣品體積小也是這種細胞計數器的額外優勢。許多儀器使用一次性的玻片，只需要10-20 uL樣品。將玻片插入自動細胞計數器中，照相機捕獲圖像。隨后內置的軟件分析圖像，顯示細胞數量等信息。
在此，專家介紹了使用自動細胞計數器的三個tip。
準確對焦與其他光學顯微鏡一樣，儀器的準確對焦對于計數很關鍵。在手動計數時，訓練有素的大腦可輕松鑒定細胞。然而，自動細胞計數器內的照相機檢測活細胞的亮中心和暗邊緣，將其處理成黑白像素信息。如果細胞未準確對焦，那么亮中心將有明顯的灰度，會被誤認為是死細胞。
大部分研究人員將會發現對焦并不難，只要顯示在屏幕上的圖像質量與傳統的顯微鏡相似。確保你有一張清晰的圖像，這很重要。另一點是要了解細胞計數器中照相機的分辨率。如果自動細胞計數器以低的幀速顯示，如每秒小于15幀，那么顯示的圖像將不能實時響應聚焦旋鈕的微調。
控制玻片之間的差異大部分基于圖像的自動細胞計數器都使用一次性的玻片，其上有明確的測量區域。這一測量區域被物鏡的放大率和照相機的圖像傳感器大小所設定。這些細胞計數器通常測定0.4-0.5 uL樣品，相當于血球計數器的4-5個大方格。
與血球計數器不同，計數玻片通常只使用一次。因此，玻片之間的差異會顯著影響細胞計數的結果。對于某一組實驗，好使用同一批號的玻片，盡量避免這些差異。在更換批號時，也建議用標準的微珠來檢驗玻片。大部分細胞計數器制造商都提供已知濃度的標準微珠。使用相同的微珠樣品來檢驗不同的玻片，將有助于發現差異。
評估軟件的分簇性能自動細胞計數器的核心是開展分析的軟件，它相當于手動計數時的人腦。大部分的自動細胞計數器包含集成軟件，能準確地計算單細胞群體的數量。然而，在談到成簇細胞的計數時，細胞計數器就會存在明顯差異。由于從培養細胞中獲得的樣品并不總是單細胞群體，因此，有時會有多個細胞團塊，而自動細胞計數器的分簇（declustering）性能也必須仔細評估。評估分簇性能時可開展圖1的檢測。
圖1. 將HL-60細胞加熱到70°C，處理20分鐘，殺死細胞，獲得死細胞樣品。隨后利用兩款不同的自動細胞計數器進行樣品的檢測。在細胞計數之后，根據軟件捕獲的圖像進行比較。紅色圓圈：死細胞；藍色圓圈：活細胞；黑色圓圈：排除的對象。
自動細胞計數器正在取代單調乏味的手動計數方法。隨著對一些基本原理的了解，自動細胞計數器將幫助你獲得佳的結果。
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更新時間：2013-04-22
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