1. 流動相A的配制：取適量的超純水分別在瓶內溶解流動相A1、A2和A3，溶解后的流動相A1、A2和A3移至1L容量瓶中，并用適量的超純水沖洗流動相A1、A2和A3的瓶壁1-2次并移至上述1L容量瓶中，以保證瓶內試劑充分被溶解移出，最后用超純水將容量瓶定容至1L。混勻，過0.22 μm有機相膜后待用。

2. 流動相B的配制：取適量的超純水在瓶內溶解流動相B，溶解后的流動相B移至1L容量瓶中，并用適量的超純水沖洗流動相B的瓶壁1-2次并移至上述容量瓶中，然后加入400 mL的色譜級甲醇和400 mL的色譜級乙腈，最后用超純水定容上述容量瓶至1L。混勻，過0.22 μm有機相膜后待用。

3. 將配制好的流動相A、B超聲30 min，除去溶劑中的氣體，防止阻塞色譜柱，影響實驗結果。

4. 標準溶液的配制（標準品需用戶自備）：取一定量氨基酸標準品，用0.1M HCl溶解為100 μg/mL或1mM的標準溶液，過0.22 μm水相膜。

5. 衍生試劑的配制：取60 mg試劑一加入0.5 mL試劑二、4.5 mL試劑三和50μL試劑四，混勻，避光待用。按此配制可以獲得約5mL的衍生化試劑，可以進行25次手動衍生，實際操作時需根據具體需求等倍增加或減少配制量。

1. 開啟電腦、打開液相色譜儀各模塊開關按鈕（使用 FLD 檢測器），安裝上 C18 色譜柱（4.6×250 mm，耐水性≥90%），打開軟件，在方法組中設置柱溫為 35℃，流速為 1 mL/min，激發波長（λex）為 340 nm，發射波長（λem）為 450 nm，洗脫程序如下表，走樣時間 60 min，設置完畢保存方法組。

2. 進樣前，需要用初始流動相平衡柱子，采用初始流動相（流動相A：流動相B=90:10）比例平衡色譜柱30 min或更久，待基線穩定后開始進樣。

2.1 自動衍生（進樣程序的設定）：吸取氨基酸標準溶液1 μL、2 μL衍生試劑（提前過好0.22 μm有機相膜）、2 μL試劑三（提前過好0.22 μm水相膜），空氣中最大混合速度混合5次，等待1 min，進樣。

2.2 若色譜儀沒有自動衍生功能，可選用手動衍生操作：吸取氨基酸標準溶液100 μL加入200 μL衍生試劑和200 μL的試劑三，渦旋5次，每次30 s，靜置1 min后過0.22 μm有機相膜，上樣。

3. 實驗需要同時做空白對照：即用等量0.1M HCl重復上述步驟，以排除干擾。