甲苯胺藍染色液(硼酸鹽法)

    甲苯胺藍(Toluidine Blue O)是一種常用的人工合成染料, 屬于醌亞胺染料類。這類染料主要含有胺基和醌型苯環兩個發色團，從而成色原顯色。甲苯胺藍中的陽離子有染色作用, 組織細胞的酸性物質與其中的陽離子相結合而被染色。甲苯胺藍不僅含有兩個發色團，還含有兩個助色團，能促使染料產生電離成鹽類, 幫助發色團對組織產生染色力, 使切片上的組織細胞著色，可染細胞核使之呈藍色；肥大細胞胞質內含有肝素和組織胺等異色性物質遇到甲苯胺藍可呈異染性紫紅色。甲苯胺藍染色液(Toluidine Blue，0.5%,硼酸鹽法)由于硼酸鹽緩沖液呈強堿性，更利于組織細胞的著色。

操作說明：（僅供參考）

(一)肥大細胞染色

1、脫蠟蒸餾水。

2、根據切片厚度和組織的不同，浸染于甲苯胺藍染色液。

3、蒸餾水或去離子水輕輕沖洗。

4、 (可選)0.5%冰乙酸分化，直到細胞核和顆粒清晰可見。

5、快速95%和無水乙醇脫水。

6、二甲苯透明，封固。

染色結果：肥大細胞呈紫紅色；背景呈淡藍色。

(二)軟骨染色

1、石蠟切片入二甲苯2次。

2、系列乙醇各。

3、自來水洗2min。

4、入Toluidine Blue O Stain浸染。

5、自來水洗2min，濾紙吸干水分。

6、丙酮分化軟骨細胞呈紫藍色清楚可見。

7、逐級乙醇脫水。

8、二甲苯透明，中性樹膠封固。

染色結果：軟骨、成骨細胞呈紫紅色；背景呈淡藍色。

(三)細胞涂片染色

1、用20%的乙醇溶液稀釋甲苯胺藍染色液, 一般要求稀釋到0.1%即可。

2、細胞涂片后，立即放入95%的乙醇中固定，取出放在紙巾上。

3、滴加稀釋后的甲苯胺藍染色液進行滴染，加蓋玻片讓染料滲透到細胞中。

4、后將玻片豎起，稍加壓力，使多余染料被紙巾吸去。

5、無需干燥，直接鏡檢。

染色結果：細胞核、淋巴細胞呈深藍色；核仁呈紫紅色；紅細胞呈橘紅；細胞質、單核細胞呈淡藍色。

(四)原位雜交染色

1、用蒸餾水或去離子水稀釋到相應的濃度，憑經驗一般稀釋比例大于1:100。

2、玻片在稀釋好的染色液中短暫浸泡。

3、在蒸餾水或去離子水浸泡數次。

4、按需求進行壓片固定。

注意事項：

1、*次使用本試劑時建議先取1-2個樣品做預實驗。

2、針對于胃粘膜組織、軟骨組織等較難著色組織的染色，浸染于甲苯胺藍染色液的時間應相應延長。

3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

相關文獻：

《Loading icariin on titanium surfaces by phase-transited lysozyme priming and layer-by-layer self-assembly of hyaluronic acid/chitosan to improve surface osteogenesis ability》 作者:Yunjia Song,Aobo Ma,Jia Ning,Xue Zhong,Qian Zhang,Xu Zhang,Guang Hong,Ying Li,and Changyi Li 期刊:International journal of nanomedicine 影響因子:4.37 PMID:30425487
《Electroacupuncture promotes peripheral nerve regeneration after facial nerve crush injury and upregulates the expression of glial cell-derived neurotrophic factor》 作者:Jing Fei, Lin Gao, Huan-Huan Li, Qiong-Lan Yuan,and Lei-Ji Li, MD 期刊:Neural Regeneration Research 影響因子:2.472 PMID:30632508
 

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