谷*酰胺酶（GLS）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1455
規格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 提取液：若試劑有結晶析出，可40℃加熱或者超聲溶解。

2. 試劑一：臨用前加入5 mL提取液充分溶解待用；

3. 試劑二B：臨用前將試劑二A倒入試劑二B中混勻（A:B=1：4比例），2-8℃保存4周；或者根據樣本量，按照體積比試劑二A：試劑二B=1:4現配現用；

4. 標準品：10 μmol/mL 氮標準液。

5. 1.25μmol/mL標準溶液的制備：臨用前取125μL 10μmol/mL氮標準液和875μL提取液混合得1.25μmol/mL的標準溶液備用。

產品說明：
谷*酰胺酶（L-glutamine amidohydrolase，EC3.5.1.2）主要存在于高等動物和某些細菌以及植物根中，催化谷*酰胺水解成谷*酸和氨，在氮素代謝中具有重要調控作用，尤其是調節游離氨含量和尿素代謝。
本試劑盒利用靛酚藍比色法測定GLS催化谷*酰胺生成的氨來計算其酶活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
臺式離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋、可調式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和雙蒸水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

1. 組織：按照質量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5-10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液），冰上勻漿后于4℃，12000g 離心15 min，取上清置于冰上待測。

2. 細胞：按照細胞數量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500-1000：1的比例（建議500萬個細胞加入1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3s，間隔7s，總時間3min）；然后4℃，12000g離心15min，取上清置于冰上待測。

3. 液體樣本：直接檢測，若有渾濁可離心后測定。

二、測定步驟

1. 可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長至630nm，分光光度計蒸餾水調零。

2. 根據樣本量取部分提取液和試劑一37℃預熱10min。

3. 樣本測定：（在1.5mL EP管或96孔中加入下列試劑）

混勻，常溫放置30min，630nm處讀取吸光值A，分別記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管，計算ΔA=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管?？瞻坠芎蜆藴使苤恍铚y1-2次。

注意事項：

1. 當ΔA大于0.8時，建議將上清液用提取液進一步稀釋后測量，計算時乘以稀釋倍數。

2. 試劑二配置后盡快使用，若發現變色則不能再用。

相關發表文獻：

1. Fu Y, Lei F, Wang J, et al. Maternal Cigarette Smoke Exposure Disturbs Glutamate/GABA Balance in pFRG of Neonatal Rats[J]. Respiratory Physiology & Neurobiology, 2020: 103383.

2. Liu S, Li N, Lin Q, et al. Glutaminase 1 in mandarin fish Siniperca chuatsi: Molecular characterization, expression pattern and function involving in virus replication[J]. Aquaculture, 2020: 734924.

參考文獻：

1. Mahajan R V, Saran S, Kameswaran K, et al. Efficient production of L-asparaginase from Bacillus licheniformis with low-glutaminase activity: optimization, scale up and acrylamide degradation studies[J]. Bioresource technology, 2012, 125: 11-16.

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