線粒體復(fù)合體 Ⅳ 試劑盒

產(chǎn)品型號：

更新時間：2025-08-25

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生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

線粒體復(fù)合體 Ⅳ 試劑盒說明書
產(chǎn)品簡介：
線粒體復(fù)合體Ⅳ又稱細胞色素 C 氧化酶，也是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分，負責催
化還原型細胞色素 C 的氧化，并終把電子傳遞給氧，生成水。
還原型細胞色素 C 在 550nm 有特征光吸收，線粒體復(fù)合體Ⅳ催化還原型細胞色素 C 生成氧化型細胞色
素 C，因此 550nm 光吸收下降速率能夠反映線粒體復(fù)合體Ⅳ酶活性。
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：25 mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑二：5 mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑三：0.5 mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑四：液體 10 mL×2 瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑×2 支，-20℃保存；
試劑六：粉劑×2 支，-20℃保存；
工作液的配制：臨用前取試劑四、試劑五、試劑六各一支，將試劑五和試劑六依次轉(zhuǎn)移到試劑四中混合
溶解。分批配制工作液是為了防止當天不能測完，導(dǎo)致工作液失敗。
操作步驟：
一、線粒體復(fù)合體 Ⅳ 的提取：
(1) 準確稱取 0.1g 組織或收集 500 萬細胞，加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
(2) 將勻漿 4℃ 600g 離心 5min。
(3) 將上清液轉(zhuǎn)移另一離心管中，4℃ 11000g 離心 10min。
(4) 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄露的復(fù)合體Ⅳ（此步可選做）。
(5) 在沉淀中加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三，超生波破碎（功率 20%，超聲 3 秒，間歇 10 秒，重復(fù) 30
次），用于復(fù)合體Ⅳ酶活性測定，并且用于蛋白含量的測定。
二、測定步驟：
1. 調(diào)零
用蒸餾水于 550nm 處調(diào)零
2. 樣本測定
(1) 取 800uL 工作液加入 1mL 玻璃比色皿中，在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）孵育 5min。
(2) 取出比色皿，加入 40uL 樣本，混勻，立即記錄 550nm 處初始吸光值 A1，37℃（哺乳動物）或 25℃（其
他物種）中準確反應(yīng) 1min，記錄 550nm 處 1min 后的吸光值 A2，計算 ?A=A1-A2。
注意：
若 A1-A2 大于 0.2，需將樣本用試劑二稀釋適當倍數(shù)，使 A1-A2 小于 0.2，可提高檢測靈敏度。
Solarbio
Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd
Tel: 010- - 56371207
Fax: 010- - 56371281/82
Http://www.solarbio。。ｃｎ
復(fù)合體 Ⅳ 活?單位的計算：
1 、組織中復(fù)合體 Ⅳ 活力的計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化降解 1nmol 還原型細胞色素 C 定義為一個酶活力單位。
復(fù)合體Ⅳ活力（U/mg prot）=反應(yīng)總體積（840µL）÷樣本體積（40µL）÷反應(yīng)時間(1min)÷細胞色素 C 消光
系數(shù)（19.1×10 -3 ）×?A÷蛋白濃度（mg/mL）=1099×?A ÷蛋白濃度（mg/mL）
(2)按樣本鮮重計算
單位定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化降解 1nmol 還原型細胞色素 C 定義為一個酶活力單位。
復(fù)合體Ⅳ活力（U/g 鮮重）=反應(yīng)總體積（840µL）÷樣本體積（40µL）÷反應(yīng)時間(1min)÷細胞色素 C 消光系
數(shù)（19.1×10 -3 ）×?A÷樣本鮮重（g/mL）=1099×?A ÷樣本鮮重（g/mL）
2 、細菌或細胞中復(fù)合體 Ⅳ 活力的計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化降解 1nmol 還原型細胞色素 C 定義為一個酶活力單位。
復(fù)合體Ⅳ活力（U/mg prot）=反應(yīng)總體積（840µL）÷樣本體積（40µL）÷反應(yīng)時間(1min)÷細胞色素 C 消光
系數(shù)（19.1×10 -3 ）×?A÷蛋白濃度（mg/mL）=1099×?A÷蛋白濃度（mg/mL）
(2)按細菌或細胞密度計算
單位定義：每 1 萬個細菌或細胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化降解 1nmol 還原型細胞色素 C 定義為一個酶活力
單位。
復(fù)合體Ⅳ活力（U/10 4 cell）=反應(yīng)總體積（840µL）÷樣本體積（40µL）÷反應(yīng)時間(1min)÷細胞色素 C 消光系
數(shù)（19.1×10 -3 ）×?A÷細菌或細胞密度（10 4 /mL）=1099×?A÷細菌或細胞密度（10 4 /mL）