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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC5960-50T/48S
更新時間：2025-08-26
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：2845
010-50973130
產品分類
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動物組織6-磷酸葡萄糖（G6P）含量檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號：BC5960
規格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一A | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
試劑一B | 液體45mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：臨用前將試劑一A全部溶于試劑一B，充分溶解后使用，未用完的試劑2-8℃保存4周（試劑顏色由透明至淡黃色為正常現象，可正常使用），禁止放-20℃保存。
2、 試劑二：臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解，未用完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復凍融。
3、 試劑三：臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解，未用完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復凍融（該試劑為凍干試劑，可能存在肉眼觀察不同瓶內試劑量相差較大甚至量很少的現象，此現象不影響使用，實際質量相同）。
4、 試劑三工作液：臨用前根據樣本量按試劑三：蒸餾水=10μL：40μL（共50μL，約4T）的比例配制后使用，現配現用。
5、 標準品：臨用前加入1.645mL蒸餾水充分溶解成20μmol/mL 6-磷酸葡萄糖標準品，2-8℃保存4周。
6、 0.5μmol/mL標準品配制：取25μL 20μmol/mL 6-磷酸葡萄糖標準品，加975μL蒸餾水充分溶解成0.5μmol/mL 標準品進行測定，現配現用。
7、 工作液：臨用前根據樣本量按試劑一：試劑二：試劑三工作液=1.45mL：25μL：25μL（共1.5mL，約2T）配成工作液后使用，現配現用。
產品說明：
6-磷酸葡萄糖（Glucose-6- Phosphate，G6P），又稱葡萄糖-6-磷酸，是糖酵解和磷酸戊糖途徑的中間產物，廣泛存在于動植物體和微生物中。在糖酵解的第一步反應中，葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸，然后通過磷酸葡萄糖異構酶的催化形成果糖-6-磷酸，以繼續糖酵解的其它步驟；而在戊糖磷酸途徑中，葡萄糖-6-磷酸是其第一個底物，該過程也是生成NADPH的主要途徑。此外，葡萄糖-6-磷酸也能轉化形成糖原或淀粉而被儲存起來。
6-磷酸葡萄糖脫氫酶可催化G-6-P和NADP+生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，在340nm處有吸收峰，據此可以計算6-磷酸葡萄糖的含量。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、1mL石英比色皿、天平、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
組織：按照質量（g）：提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入取液，冰浴勻漿后于沸水浴煮5min（用封口膜封口，防止爆蓋），冷卻至室溫后于4℃ 12000g離心10min，取上清置冰上待測。
二、測定步驟
1、 紫外分光光度計預熱30min以上，調節波長至340nm，用蒸餾水調零。
2、 工作液37℃預熱5min。
3、 樣本測定（在1mL石英比色皿中加入下列試劑）
試劑名稱（μL） | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
樣本 | 250 | - | - |
標準品 | - | 250 | - |
蒸餾水 | - | - | 250 |
工作液 | 750 | 750 | 750 |
充分混勻，立即測定340nm下10s時的吸光度A1，然后迅速置于37℃反應10min，測定10min10s時的吸光度A2，分別記為A1測定、A2測定、A1標準、A2標準、A1空白、A2空白。計算ΔA標準=（A2標準-A1標準）-（A2空白-A1空白），ΔA測定=（A2測定-A1測定）-（A2空白-A1空白）。標準管和空白管只需測1-2次。 | |||
三、6-磷酸葡萄糖含量計算公式
1. 按樣本蛋白濃度計算：
G6P含量（μmol/g prot）=ΔA測定÷（ΔA標準÷C標準）×V提取÷（Cpr×V提取）×F
=0.5×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr×F
2. 按樣本質量計算：
G6P含量（μmol/g 質量）=ΔA測定÷（ΔA標準÷C標準）×V提取÷W×F
=0.5×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F
C標準：標準點濃度，0.5μmol/mL；V提取：加入提取液的體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；F：稀釋倍數。
注意事項：
1. 最好兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。
2. 若樣本ΔA測定<0.01，可適當增大樣本量后測定；若樣本ΔA測定>1.2或A測定>1.5，可用蒸餾水稀釋上清液后測定，注意同步修改計算公式中的稀釋倍數。
實驗實例：
1、 取0.102g大鼠肝臟加入提取液進行冰浴勻漿，取上清后按照測定步驟操作，用1mL石英比色皿測得ΔA測定=（A2測定-A1測定）-（A2空白-A1空白）=（0.285-0.175）-（0.005-0.005）=0.110，ΔA標準=（A2標準-A1標準）-（A2空白-A1空白）=（0.492-0.023）-（0.005-0.005）=0.469，按樣本質量計算6-磷酸葡萄糖含量得：
G6P含量（μmol/g 質量）=0.5×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F =1.150 μmol/g質量。
2、 取0.103g大鼠肺加入提取液進行冰浴勻漿，取上清后按照測定步驟操作，用1mL石英比色皿測得ΔA測定=（A2測定-A1測定）-（A2空白-A1空白）=（0.199-0.127）-（0.005-0.005）=0.072，ΔA標準=（A2標準-A1標準）-（A2空白-A1空白）=（0.492-0.023）-（0.005-0.005）=0.469，按樣本質量計算6-磷酸葡萄糖含量得：
G6P含量（μmol/g 質量）=0.5×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F =0.745 μmol/g 質量。
參考文獻：
[1] Belford J, Feinleib M R .The increase in glucose-6-phosphate content of the heart after the administration of inotropic catecholamines, calcium, and aminophylline[J].Biochemical Pharmacology, 1962, 11(11):987-994.
[2] Ashcroft S , Capito K , Hedeskov C .Time course studies of glucose-induced changes in glucose-6-phosphate and fructose-1, 6-diphosphate content of mouse and rat pancreatic islets[J].Diabetologia, 1973, 9(4):299-302.
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