PFP試劑盒光合作用

產(chǎn)品簡介：

儲存條件
-20℃
中文名稱
PFP試劑盒光合作用
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Pyrophosphate: Fructose-6-Phosphate-1-Phosphoric Acid Transferase(PFP) Activity Assay Kit
別名
焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶（PFP）試劑盒焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸

產(chǎn)品型號：BC3400-50T/48S

更新時間：2025-08-26

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1594

服務熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

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產(chǎn)品介紹

焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶（PFP）活性檢測試劑盒說明書

紫外分光光度法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。

貨號：BC3400

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體55 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體40 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×1瓶	-20℃保存
試劑三	粉劑×1瓶	-20℃保存
試劑四	液體×2支	2-8℃保存
試劑五	液體×2支	-20℃保存
試劑六	液體60 μL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1、試劑二：臨用前加6 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存兩周，禁止反復凍融。

2、試劑三：臨用前加6 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存兩周，禁止反復凍融。

3、試劑四：臨用前取1支加入0.3 mL蒸餾水溶解備用，2-8℃保存一周。

4、試劑五：臨用前取1支加入0.3 mL蒸餾水溶解備用，-20℃分裝保存一周，禁止反復凍融。

5、試劑六：臨用前加入0.6 mL蒸餾水溶解備用，2-8℃保存一周，也可按比例現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說明：

焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶（PFP，EC2.7.1.90）是一種胞質(zhì)酶，廣泛存在于植物組織中，與磷酸果糖激酶一樣催化果糖-6-磷酸的磷酸化，單PEP催化反應為可逆反應，并以焦磷酸代替ATP，在光合作用碳代謝中起重要作用。

PFP催化6-磷酸果糖轉(zhuǎn)化為1,6-二磷酸果糖，它在醛縮酶和磷酸丙糖異構酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)榱姿岫u丙酮，再由α-磷酸甘油脫氫酶和NADH催化生成3-二磷酸甘油和NAD，340nm處的吸光度變化反映了PFP的活性的高低。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1 mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

1、組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1 g，加入1 mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，20000 g離心15 min，取上清置冰上待測；

2、細胞：按照細胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1 mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300 W，超聲3 s，間隔7 s，總時間3 min）；然后4℃，20000 g離心15 min，取上清置冰上待測；

3、液體：直接檢測。

二、測定步驟

1、分光光度計預熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至340 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表：

試劑名稱（μL）	測定管	空白管
試劑一	670	670
試劑二	100	100
試劑三	100	100
試劑四	10	10
試劑五	10	10
試劑六	10	10
樣本	100	-
蒸餾水	-	100
充分混勻于1 mL石英比色皿中測定37℃條件下，340 nm處初始值A1和30 min的吸光值A2，分別記為A1測定管、A1空白管、A2測定管，A2空白管。計算 ΔA= （A1測定管-A2測定管）-（A1空白管-A2空白管）。注：也可將試劑一、二、三、四、五、六按操作表比例，配制成工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用；空白管只需做1-2次。

三、焦磷酸：果糖6-磷酸-1磷酸轉(zhuǎn)移酶活性的計算

（1）按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

PFP（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V反總×10⁹÷(V樣×Cpr) ÷T=53.59×ΔA÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計算

酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

PFP（U/g 質(zhì)量）=ΔA÷（ε×d）×V反總×10⁹÷(W×V樣÷V提取) ÷T=53.59×ΔA÷W

（3）按照細胞數(shù)量計算

酶活單位定義：每10⁴個細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

PFP（U/10⁴ cell）= ΔA÷（ε×d）×V反總×10⁹÷(V樣×細胞數(shù)量÷V提取) ÷T=53.59×ΔA÷細胞數(shù)量

（4）按照液體體積計算

酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

PFP（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V反總×10⁹÷V樣÷T=53.59×ΔA

V反總：反應體系總體積，0.001 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1 cm；V樣：加入樣本體積，0.1 mL；V提?。杭尤胩崛∫后w積，1 mL；T：反應時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；10⁹：換算系數(shù)，1mol=10⁹ nmol。