單脫氫抗壞血酸還
原酶（MDHAR）活性檢測(cè)試劑盒說明書
微量法
貨號(hào)：BC0655
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
1、試劑二：臨用前加入2 mL蒸餾水充分溶解，2-8℃保存；
2、試劑三：臨用前加入3.33 mL蒸餾水充分溶解待用，可溶解后分裝-20℃保存，避免反復(fù)凍融；
3、試劑四：液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中。臨用前加2 mL試劑一充分溶解，可溶解后分裝-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品說明：
MDHAR催化MDHA還原生成AsA，在抗壞血酸氧化還原代謝中具有重要作用。
MDHAR催化NADH還原MDHA生成AsA和NAD⁺，NADH在340 nm有特征吸收峰，但是NAD⁺沒有。通過測(cè)定340nm光吸收下降速率，來計(jì)算出MDHAR活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
研缽/勻漿器、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔UV板、可調(diào)式移液槍和雙蒸水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g橙子果肉加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心10min，取上清置冰上，按照測(cè)定步驟操作，用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定=0.8701-0.8396=0.0305，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.5515-0.5474=0.0041，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：MDHAR活性 (U/g 質(zhì)量) =0.268×(ΔA測(cè)定管-ΔA空白管)÷W=0.268×（0.0305-0.0041）÷0.1=0.070752 U/g 質(zhì)量。

注意事項(xiàng)：

1. 
   

1. 
   

2. 當(dāng)ΔA測(cè)定大于0.3時(shí)（96孔板ΔA測(cè)定大于0.2），建議客戶稀釋樣本或者調(diào)整試劑一和上清液的比例（如將400μL試劑一+300μL上清液改為600μL試劑一+100μL上清液）后進(jìn)行測(cè)定。

3. 當(dāng)ΔA測(cè)定過小時(shí)，建議客戶提高樣本量或者調(diào)整試劑一和上清液的比例（如將400μL試劑一+300μL上清液改為200μL試劑一+500μL上清液）。

4. 當(dāng)A1大于1.5時(shí)（酶標(biāo)儀測(cè)定時(shí)A1大于2時(shí)），建議將樣本稀釋進(jìn)行測(cè)定。

5. 空白管為檢測(cè)各管試劑組份的檢測(cè)孔，正常情況下，其OD值在0.5左右（96孔板在0.3左右），變化不超過0.01。

6. 由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以在測(cè)定樣品蛋白濃度時(shí)需要減去提取液本身的蛋白含量。

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相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Yali Zhou,Sufang Huo,Liting Wang,et al. Exogenous 24-Epibrassinolide alleviates oxidative damage from copper stress in grape (Vitis vinifera L.) cuttings. Plant Physiology and Biochemistry. September 2018;(IF3.404)

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC1230/BC1235 抗壞血酸（AsA）含量檢測(cè)試劑盒
BC1240/BC1245 脫氫抗壞血酸（DHA）含量檢測(cè)試劑盒
BC1260/BC1265 抗壞血酸氧化酶（AAO）活性檢測(cè)試劑盒
 

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