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專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC3970-50T/24S
更新時間：2024-04-12
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：753
010-50973130
產(chǎn)品分類
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土壤谷氨*胺酶（S-GLS）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC3970
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 試劑一 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三A | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
| 試劑三B | 液體4 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑四 | 液體5 mL×1瓶 | 常溫保存 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑二：臨用前取1瓶加入6 mL蒸餾水溶解，用不完的試劑2-8℃保存一周；
試劑三：臨用前根據(jù)樣本量按比例（A:B=1:4）配制，現(xiàn)配現(xiàn)用；若發(fā)現(xiàn)變色后則不能再使用；
標(biāo)準(zhǔn)品：10 µmol/mL氮標(biāo)準(zhǔn)液。取8μL 10µmol/mL氮標(biāo)準(zhǔn)液，加入1016μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.078μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液待測。（實驗中每管需要400μL，為減小實驗誤差，故配制大體積。）
產(chǎn)品說明：
S-GLS（EC3.5.1.2）存在于某些細(xì)菌以及植物根中，催化谷氨*胺水解成谷*酸和氨，在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用，尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝。
S-GLS催化谷氨*胺水解成L-谷*酸和氨，利用靛酚藍(lán)比色法測定氨增加的速率，即可計算其酶活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、30~50目篩、研缽、甲苯（不允許快遞）、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。
二、測定步驟
分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至630nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定（在EP管中加入下列試劑）
| 試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
| 風(fēng)干土樣（g） | 0.1 | 0.1 | - | - |
| 甲苯（μL） | 50 | 50 | - | - |
| 充分震蕩后常溫靜置10min。 | - | - | ||
| 試劑一（μL） | 550 | 550 | - | - |
| 試劑二（μL） | 400 | - | - | - |
| 蒸餾水 | - | 400 | - | 400 |
| 充分混勻，37℃水浴或恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1h。10000g常溫離心10 min，取上清液待測。 | - | - | ||
| 上清液 | 400 | 400 | - | - |
| 0.078μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液 | - | - | 400 | - |
| 試劑三 | 80 | 80 | 80 | 80 |
| 試劑四 | 60 | 60 | 60 | 60 |
| 蒸餾水 | 460 | 460 | 460 | 460 |
混勻，室溫放置30min，630nm處讀取吸光值A，分別記為A測定管、A對照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管，計算ΔA測定=A測定管-A對照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。標(biāo)準(zhǔn)管與空白管只需測1-2次。
注意事項：
當(dāng)測定吸光值大于0.7時，建議將上清液用蒸餾水進(jìn)一步稀釋后測量。計算時乘以稀釋倍數(shù)。
離心后若上清液仍含有少量雜質(zhì)，可將上清液再次10000g，常溫離心10min去除。
實驗實例：
稱取兩管0.1g土樣，分別為測定管和對照管，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測定吸光值。計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.552-0.116=0.436，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.216-0.005=0.211，計算酶活得：
S-GLS（U/g 土樣）=1.872×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=1.872×0.436÷0.211÷0.1=38.682 U/g 土樣。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
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