細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)

產品說明：
自噬(autophagy)是細胞受到刺激后吞噬自身的細胞質或細胞器，終將吞噬物在溶酶體內降解的過程，自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結構，內含細胞質、長壽蛋白質和異常蛋白聚集物，損傷或多余細胞器如線粒體、粗面內質網和微體、病毒和細菌等。單丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一種熒光色素，是嗜酸性染色劑，通常被用于檢測自噬體形成的特異性標記染色劑，其檢測激發濾光片波長 355nm。阻斷濾光片波長 512nm。細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC 法)，適用于培養細胞的自噬染色，又稱為 MDC 染色液，可與EB 合用雙染。

自備材料：
熒光顯微鏡、低速離心機、EB 、載玻片、蓋玻片

操作步驟(僅供參考)：
(一)、MDC單獨染色：
1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。
2、 800g離心5min，收集細胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細胞1次，棄上清。
3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細胞，計數并調節細胞濃度106/ml。
4、 取適量90μl的細胞懸液新的EP管中，加入10μl的MDC Stain，輕輕混勻。
5、 室溫避光染色15～45min。
6、 800g離心5min，收集細胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細胞2次，棄上清。
7、 加入100μl的Collection buffer重懸細胞，滴加于載玻片上并加蓋玻片。
8、 熒光顯微鏡下觀察(激發濾光片波長355nm，阻斷濾光片波長512nm)，計數并拍照。

注:貼壁細胞可以不消化，直接去除培養液，用1×Wash buffer清洗后進行染色。MDC的量根據細胞數量進行調整。染色時間可適當延長根據染色結果進行調整，染色結束后，用1×Wash buffer清洗觀察即可，不加Collection buffer。

(二)、與EB雙染色：
1、用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。
2、800g離心5min，收集細胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細胞1次，棄上清。
3、加入適量的1×Wash buffer重懸細胞，計數并調節細胞濃度106/ml。
4、取適量90μl的細胞懸液新的EP管中，分別加入10μl的MDC Stain和0.2μM EB染色液，輕輕混勻。
5、滴加于在玻片上，室溫避光染色15～30min，加蓋玻片。
6、熒光顯微鏡下觀察(激發濾光片波長512nm)，計數并拍照。

相關文獻：

《Effect of Gpx3 gene silencing by siRNA on apoptosis and autophagy in chicken cardiomyocytes.》 作者:Yafan Gong  Jie Yang  Jingzeng Cai  Qi Liu  Jun min Zhang  Ziwei Zhang 期刊:J. Cell. Physiol. 影響因子:4.522 PMID:30515791
《Upregulation of DAPK2 ameliorates oxidative damage and apoptosis of placental cells in hypertensive disorder complicating pregnancy by suppressing human placental microvascular endothelial cell autophagy through the mTOR signaling pathway》 作者:Yan Wang,Lian-Lian Liu,Yuan Tian,Yang Chen,Wen-Hui Zha,Yang Li,Fu-Ju Wu 期刊:Int. J. Biol. Macromol. 影響因子:4.784 PMID:30243997
 

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