有效期
6個月
儲存條件
-20℃
單位
盒
英文名稱
CoenzymeⅡ NADP(H) Content Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S
NADP磷酸酶(NADPase)活性檢測試劑盒輔酶

產(chǎn)品型號：BC1110-50T/24S

更新時間：2024-04-24

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1455

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

NADP磷酸酶（NADPase）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號: BC1110
規(guī)格: 50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體30 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體20 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×2支	2-8℃保存
試劑三	粉劑×1 瓶	2-8℃保存
試劑四	粉劑×1 瓶	2-8℃保存
試劑五	液體20 mL×1 瓶	常溫保存
標(biāo)準(zhǔn)品	液體1 mL×1 支	2-8℃保存

溶液的配制：

試劑二：用時加入1.5 mL試劑一充分溶解備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑三：用時加入20 mL雙蒸水，溶解后2-8℃可保存一周。
試劑四：用時加入20 mL雙蒸水，溶解后2-8℃可保存一周。
標(biāo)準(zhǔn)品：10 mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液。將標(biāo)準(zhǔn)品20倍稀釋，即取 0.5 mL標(biāo)準(zhǔn)液加9.5 mL蒸餾水，充分混勻，配制成0.5 μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液。
定磷試劑的配制：按H₂O：試劑三：試劑四：試劑五=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷試劑應(yīng)為淺黃色，若無色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷試劑根據(jù)實驗用量現(xiàn)用現(xiàn)配。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
產(chǎn)品說明：
NADPase主要存在于植物組織中，是生物體內(nèi)催化NADP⁺降解為NAD⁺的酶，與NADK一起調(diào)控NAD和NADP之間的平衡。
NADPase能夠催化NADP⁺水解為NAD⁺和無機(jī)磷的反應(yīng)，通過測定無機(jī)磷的量來測定NADPase活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL玻璃比色皿、勻漿器/研缽和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

注意事項：

此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對測定所用試管要求嚴(yán)格，要沒有一點(diǎn)磷，若試管放過磷酸或磷酸鹽緩沖液，一定要洗得非常干凈，要先用洗潔精加水煮，再用自來水沖，最后用蒸餾水沖干凈。最好用一次性塑料管或新玻璃管，避免磷污染是檢測成敗的關(guān)鍵。
由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以在測定樣本蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。

實驗實例：

取0.1肝加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A測定-A對照=0.410-0.385=0.025，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.365-0.005=0.360，按樣本質(zhì)量計算酶活得：NADPase (U/g質(zhì)量)=0.125×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=0.125×0.025÷0.360÷0.1=0.087 U/g質(zhì)量。
取0.1g狗尾巴草（塊根)加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定= A測定-A對照=0.510-0.107=0.403，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.365-0.005=0.360，按樣本質(zhì)量計算酶活得：NADPase (U/g質(zhì)量) =0.125×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=0.125×0.403÷0.360÷0.1=1.399 U/g質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)：

Kawai S, Mori S, Mukai T, et al. Cytosolic NADP phosphatases I and II from Arthrobacter sp. strain KM: implication in regulation of NAD⁺/NADP⁺ balance[J]. Journal of Basic Microbiology: An International Journal on Biochemistry, Physiology, Genetics, Morphology, and Ecology of Microorganisms, 2004, 44(3): 185-196.

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