有效期
6個月
儲存條件
-20℃
單位
盒
英文名稱
Transhydrogenase-2 Activity Assay Kit
檢測方法
紫外分光光度法
規(guī)格
50T/48S
轉(zhuǎn)氫酶-2活性檢測試劑盒

產(chǎn)品型號：BC3260-50T/48S

更新時間：2024-04-09

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1665

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

轉(zhuǎn)氫酶-2（TH-2）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號：BC3260
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體50 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	粉劑×2瓶	-20℃保存
試劑二	粉劑×2瓶	-20℃保存
試劑三	液體50 mL×1瓶	2-8℃保存

溶液的配制：

試劑一：臨用前取1瓶加入6 mL試劑三。用不完的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復凍融。
試劑二：臨用前取1瓶加入10 mL試劑三。用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復凍融。

產(chǎn)品說明：
轉(zhuǎn)氫酶位于線粒體的內(nèi)膜上，又稱為線粒體復合體六，催化NADH+NADP⁺和NAD⁺+NADPH相互轉(zhuǎn)化，調(diào)節(jié)線粒體NAD(H)和NADP(H)平衡。把逆向反應(yīng)稱為TH-2，催化NADPH和NAD⁺生成NADP⁺和NADH。
NADH和NADPH均在340nm有特征吸收，因此TH催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸（APAD⁺）替代NAD⁺，TH-2催化APAD⁺還原生成APADH，APADH在375nm有特征光吸收，測定375nm光吸收的增加速率，來計算TH-2活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項：

如果測定的吸光值過高（高于1.2）或者ΔA大于0.25時，可用提取液或試劑三稀釋上清液后再測定。
樣本蛋白濃度需自行測定。由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以在測定樣本蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。
ΔA對照或ΔA測定出現(xiàn)負值為正常現(xiàn)象。
推薦使用樣本蛋白濃度計算酶活，若用樣本質(zhì)量計算，則需加測胞漿提取物酶活，上清和沉淀酶活之和方為總酶活。
本試劑盒試劑足夠完成50管反應(yīng)。
附:按樣本重量計算公式：（樣本檢測數(shù)為50T/12S）

A、上清中TH-2活力的計算
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘產(chǎn)生1 nmol APADH定義為一個酶活性單位。
TH-2（U/g 質(zhì)量）=[ΔA1×V反總÷（ε×d）]÷(W÷V提取×V樣本) ÷T=498×ΔA1÷W
ΔA1：上清測定值；V反總：反應(yīng)總體積，1mL；ε：APADH的消光系數(shù)，6.7×10^-3mL/nmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V提取：加入提取液體積，1.0mL；V樣本：樣本體積，0.1mL； T：反應(yīng)時間，3min。
B、沉淀中TH-2活力的計算
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘產(chǎn)生1 nmol APADH定義為一個酶活性單位。
TH-2（U/g 質(zhì)量）=[ΔA2×V反總÷（ε×d）]÷(W÷V提取×V樣本) ÷T=398×ΔA1÷W
ΔA2：沉淀測定值；V反總：反應(yīng)總體積，1mL；ε：APADH的消光系數(shù)，6.7×10^-3mL/nmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V提取：復溶沉淀的提取液體積，0.8mL；V樣本：樣本體積，0.1mL；T：反應(yīng)時間，3min。
C、樣本復合體TH-2總活力的計算
樣本TH-2總活力即為上清中TH-2活力與沉淀中TH-2活力之和。
按樣本質(zhì)量計算：復合體TH-2（U/g 質(zhì)量）=498×ΔA1÷W+398×ΔA2÷W

參考文獻：

Vandock K P, Drummond C A, Smith S L, et al. Midgut and fatbody mitochondrial transhydrogenase activities during larval-pupal development of the tobacco hornworm, Manduca sexta[J]. Journal of insect physiology, 2010, 56(7): 774-779.

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