磷酸丙糖異構(gòu)酶活性檢測試劑盒光合作用

產(chǎn)品簡介：

磷酸丙糖異構(gòu)酶活性檢測試劑盒光合作用
單位
盒
儲存條件
-20℃
有效期
6個月
英文名稱
Triose Phosphate Isomerase (TPI) Activity Assay Kit
檢測方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產(chǎn)品型號：BC2260-50T/48S

更新時間：2024-04-18

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1577

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

磷酸丙糖異構(gòu)酶（TPI）活性檢測試劑盒說明書

紫外分光光度法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

貨號：BC2260

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液一	液體60mL×1瓶	2-8℃保存
提取液二	液體60mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體35mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×2瓶	-20℃保存
試劑三	粉劑×2瓶	-20℃保存
試劑四	粉劑×3支	-20℃保存

溶液的配制：

1、試劑二：臨用前取1瓶加入3mL蒸餾水，充分溶解；用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；

2、試劑三：臨用前取1瓶加入3mL蒸餾水，充分溶解；用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；

3、試劑四：提供一個棕色試劑空瓶，臨用前取一支試劑四加入2.5mL蒸餾水，充分溶解；用不完的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品說明：

植物葉綠體中磷酸丙糖異構(gòu)酶（TPI）是光合作用中參與calvin循環(huán)的重要酶。作用于磷酸甘油醛和磷酸二羥丙酮之間的轉(zhuǎn)化，磷酸二羥丙酮能快速透過葉綠體的包膜進入細(xì)胞質(zhì)，并在其中逐步轉(zhuǎn)化為蔗糖。

磷酸丙糖異構(gòu)酶將磷酸二羥丙酮轉(zhuǎn)化為3-磷酸甘油醛，3-磷酸甘油醛與NAD在3-磷酸甘油醛脫氫酶的作用下生成3-磷酸甘油酸和NADH，340nm處的吸光度變化反映了磷酸丙糖異構(gòu)酶的活性的高低。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計、天平、水浴鍋、臺式低溫離心機、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、細(xì)胞超聲破碎儀、研缽/勻漿器、冰、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1. 總TPI提取：按照組織質(zhì)量（g）︰提取液一體積(mL)為1︰5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液一）進行冰浴勻漿，勻漿后冰浴超聲波破碎（功率200W，超聲3s，間隔7s，總時間1min），于4℃，8000g離心10min，取上清，置于冰上待測。

2. 胞漿和葉綠體TPI的分離：

（1）按照組織質(zhì)量（g）︰提取液一體積(mL)為1︰5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液一）進行冰浴勻漿，勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，留取上清。

（2）上清于4℃，8000g離心10min，取上清用于測定胞漿TPI活性，

（3）在第二步離心后的沉淀加1mL提取液二，震蕩混勻后冰浴超聲波破碎（功率200W，超聲3s，間隔7s，總時間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測定葉綠體中TPI活性。

建議測定總TPI活性，按照步驟1提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的TPI，則按照步驟2提取粗酶液。

二、測定步驟

1. 紫外分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一預(yù)熱15min以上。

3. 測定管：依次取600μL試劑一、100μL試劑二、100μL試劑三、100μL試劑四和100μL粗酶液于1mL石英比色皿，迅速吹打混勻，立即記錄340nm處20s的吸光值A1，迅速置于37℃水浴鍋或培養(yǎng)箱5min，拿出迅速擦干測定5min20s時的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。

三、磷酸丙糖異構(gòu)酶活性計算

1. 按樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義：每mg組織蛋白每min生成1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

TPI活性（U/mg prot）＝(ΔA÷ε÷d)×V反×10⁹÷V樣÷Cpr÷T×F=321.54×ΔA÷Cpr×F

2. 按照樣本質(zhì)量計算

酶活單位定義：每g組織每min生成1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

TPI活性（U/g 質(zhì)量）＝(ΔA÷ε÷d)×V反×10⁹÷V樣×V提÷W÷T×F=321.54×ΔA÷W×F

ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；10⁹：單位換算系數(shù)，1mol=10⁹nmol；V反：反應(yīng)總體積，1.0×10^-3L；V樣：加入樣本上清體積，0.1mL；V提：加入提取液一或提取液二的體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；T：反應(yīng)時間，5min；F：稀釋倍數(shù)。