D-乳酸（D-LA）含量檢測試劑盒糖酵解

產(chǎn)品簡介：

中文名稱
D-乳酸（D-LA）含量檢測試劑盒糖酵解
有效期
6個月
儲存條件
-20℃
單位
盒
英文名稱
D-Lactic acid（D-LA） Content Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S

產(chǎn)品型號：BC5350-50T/24S

更新時間：2024-04-19

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1460

服務熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

D-乳酸（D-LA）含量檢測試劑盒（WST顯色法）說明書

可見分光光度法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。

貨號：BC5350

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液一	液體30 mL×1瓶	2-8℃保存
提取液二	液體5 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體30 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×2支	-20℃保存
試劑三	粉劑×1瓶	-20℃保存
試劑四	液體12 mL×1瓶	2-8℃保存
標準品	液體1mL×1支	-20℃保存

溶液的配制：

1、試劑二：臨用前取一支加入160μL蒸餾水溶解。2-8℃可以保存4周（該試劑為凍干試劑，可能存在肉眼觀察試劑量相差較大甚至量很少的現(xiàn)象，此現(xiàn)象不影響使用，實際質(zhì)量相同）；

2、試劑二工作液的配制：臨用前按試劑二（V）：蒸餾水（V）=10μL：90μL（1T）的比例配制，現(xiàn)用現(xiàn)配，用多少配多少；

3、試劑三：臨用前加入15 mL 蒸餾水混勻，可分裝后-20℃保存，避免反復凍融，-20℃保存4周；

4、標準品：1000μmol/mL D-乳酸標準液。臨用前取20μL 1000μmol/mL D-乳酸標準液和1980μL蒸餾水混合配成10μmol/mL 標準溶液；再吸取20μL 10μmol/mL 標準溶液和620μL蒸餾水混合配成0.3125μmol/mL 標準溶液備用。

產(chǎn)品說明：

乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān)，乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。D-乳酸在D-乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時使NAD⁺還原生成NADH和H⁺，在1-mPMS作用下，WST-1可與NADH反應，產(chǎn)生水溶性formazan，其在450nm處有最大吸收峰，據(jù)此可計算D-乳酸含量。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、分析天平、研缽/勻漿器/超聲波細胞破碎儀、離心機、1mL玻璃比色皿、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)

箱、蒸餾水和冰。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

組織：按照質(zhì)量（g）：提取液一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴勻漿后于4℃，12000g離心10min，取0.8mL上清液，再緩慢加入0.15mL提取液二，緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生，4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

細胞：按照細胞數(shù)量（10⁴個）：提取液一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；于4℃，12000g離心10min，取0.8mL上清液，再緩慢加入0.15mL提取液二，緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生，4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

血清（漿）等液體：取100μL液體加入1mL提取液一，4℃ 12000g離心10min，取0.8mL上清液，再緩慢加入0.15mL提取液二，緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生，12000g離心10min后取上清待測。

注：提取液二需緩慢加入，加入后會產(chǎn)生大量氣泡，建議使用2mL EP管進行操作。

二、測定步驟

1、分光光度計預熱30min以上，波長調(diào)至450nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表：（按順序?qū)⑾铝性噭┘釉?/span>EP管中）

試劑名稱（μL）	測定管	對照管	標準管	空白管
樣本	100	100	-	-
標準溶液	-	-	100	-
蒸餾水	-	100	-	100
試劑一	450	450	450	450
試劑二工作液	100	-	100	100
試劑三	200	200	200	200
試劑四	150	150	150	150
充分混勻，于37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱避光準確反應30min，取全部反應液到1mL比色皿中，于450nm處測定吸光值，分別記為A測定管，A對照管，A標準管，A空白管，計算ΔA測定=A測定管-A對照管；ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管需設(shè)置一個對照管，空白管和標準管只需測定1-2次。

三、D-乳酸含量的計算

1. 按照蛋白含量計算

D-LA含量（μmol/mg prot）= ΔA測定÷（ΔA標準÷C標準）×V樣本÷（V樣本×Cpr）
= 0.3125×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計算

D-LA含量（μmol/g 質(zhì)量）

= ΔA測定÷（ΔA標準÷C標準）×（V上清+V提取液二）÷（W×V上清÷V提取液一）

=0.3711×ΔA測定÷ΔA標準÷W

3. 按照細胞數(shù)量計算

D-LA含量（μmol/10⁶cell）

= ΔA測定÷（ΔA標準÷C標準）×（V上清+V提取液二）÷（N×V上清÷V提取液一）

= 0.3711×ΔA測定÷ΔA標準÷N

4. 按照液體體積計算

D-LA含量（μmol/mL）

=ΔA測定÷（ΔA標準÷C標準）×（V上清+V提取液二）÷ [V液體×V上清÷（V提取液一+V液體）]

=4.082×ΔA測定÷ΔA標準

C標準：標準溶液濃度，0.3125μmol/mL；V樣本：加入的樣本體積，0.1mL；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，蛋白濃度需自行測定；V上清：提取時上清液體積，0.8mL；V提取液二：加入的提取液二體積，0.15mL；V提取液一：加入的提取液一體積，1mL；N：細胞數(shù)量，以10⁶計；V液體：液體樣本體積，0.1mL。

注意事項：

1. 提取液一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定。如需測定蛋白含量，需另取組織。

2. ΔA測定的測定范圍在0.01-1.2之間。如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以用蒸餾水稀釋樣本后再次測定，如果測定吸光值小于線性范圍吸光值，需要增加樣本量后再次測定，注意同步計算公式。

實驗實例：

1、取0.104g兔肌肉加入1mL提取液一，冰浴勻漿后離心，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，離心取上清后按照測定步驟操作，使用比色皿測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.637-0.308=0.329，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.636-0.124=0.512，按照樣本質(zhì)量計算含量得：

D-LA含量（μmol/g 質(zhì)量）= 0.3711×ΔA 測定÷ΔA標準÷W =2.2929 μmol/g質(zhì)量。

2、取100μL牛血清加入1mL提取液一，離心，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，離心取上清，之后按照測定步驟操作，使用比色皿測得計算ΔA測定管=A測定管-A對照管=0.356-0.302=0.054，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.636-0.124=0.512，按照液體體積計算含量得：