細胞鐵含量檢測試劑盒離子

產品簡介：

細胞鐵含量檢測試劑盒離子
儲存條件
2-8℃
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Cell Iron Content Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產品型號：BC5310-50T/48S

更新時間：2024-04-19

廠商性質：生產廠家

訪問量：1691

服務熱線

010-50973130

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產品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

產品介紹

細胞鐵含量檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC5310

規(guī)格：50T/48S

產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體30 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體15 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	液體35 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑三	液體6 mL×1瓶	2-8℃保存
標準液	液體1 mL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1. 標準液：1 μmol/mL Fe³⁺標準液，臨用前取200μL 1 μmol/mL Fe³⁺標準液，加入200μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.5μmol/mL標準液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實驗中每管需要100μL，為減小實驗誤差，故配制大體積。）

產品說明：

鐵元素是人體必須的微量元素之一，它是血紅蛋白、肌紅蛋白、細胞色素及其他酶系統(tǒng)的主要成分，幫助氧的運輸，促進脂肪氧化。缺乏鐵元素容易造成貧血、代謝紛亂，并影響機體的免疫功能。

鹽酸羥胺將細胞中的Fe³⁺還原成Fe²⁺，Fe²⁺在弱酸條件下與鄰菲羅啉形成橙紅色配合物，在510nm處有吸收峰，測定該波長吸光度即可計算鐵含量。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、低溫離心機、可調式移液器、超聲破碎儀、1mL玻璃比色皿、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

按照細胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為1000~2000︰1的比例（建議500萬細胞加入0.5mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率200W，超聲3秒，間隔7秒，重復30次），于4℃，8000g離心10min，取上清待測。

若樣本為真菌、細菌等有細胞壁的微生物可以適當延長超聲時間。

二、測定步驟

1. 可見分光光度計預熱30min，波長調至510nm，蒸餾水調零。

2. 在1.5mL EP管按下表步驟加樣：

試劑名稱（μL）	測定管	空白管	標準管
樣本	100	-	-
蒸餾水	-	100	-
標準溶液	-	-	100
試劑一	200	200	200
試劑二	600	600	600
試劑三	100	100	100
充分混勻，25℃靜置顯色10min，于1mL玻璃比色皿中測定510nm處吸光值，分別記為A測定、A空白和A標準，計算ΔA測定=A測定-A空白，ΔA標準=A標準-A空白。空白管和標準管只需做1-2次。

三、細胞鐵含量計算

1. 按細胞數(shù)目計算：

細胞鐵含量（ng/10⁴ cell）=（C標準液×ΔA測定÷ΔA標準）×V提取×10³×55.845÷500

=27.922×ΔA測定÷ΔA標準

2. 按蛋白濃度計算：

細胞鐵含量（ng/mg prot） =（C標準液×ΔA測定÷ΔA標準）×V提取×10³×55.845÷（Cpr×V提取）

= 27922.5×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr

C標準液：0.5μmol/mL Fe³⁺標準液；V提取：加入提取液體積，0.5mL；10³：單位換算系數(shù)，1μmol=10³nmol；55.845：Fe的相對原子質量，55.845ng/nmol；500：細胞數(shù)目，500萬；Cpr：蛋白質濃度，mg/mL。

注意事項：

1、如果ΔA測定＜0.01，可適當加大樣本量后重新測定；如果測定管吸光值大于1，建議將樣本用蒸餾水適當稀釋后進行測定。注意同步修改計算公式。

2、如果按蛋白濃度計算細胞鐵含量，需自行測定樣本上清蛋白濃度。

實驗實例：

1、取500萬HePG2細胞加入0.5mL提取液進行超聲破碎提取，離心取上清后按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.171-0.000=0.171，ΔA標準=A標準-A空白=0.573-0.000=0.573，按細胞數(shù)目計算含量得：

細胞鐵含量（ng/10⁴ cell）=27.922×ΔA測定÷ΔA標準=8.333 ng/10⁴ cell

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