肌酐含量檢測試劑盒氮代謝

產品簡介：

儲存條件
-20℃
中文名稱
肌酐含量檢測試劑盒氮代謝
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Creatinine（Cr）Content Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規格
50T/48S

產品型號：BC4910-50T/48S

更新時間：2024-03-23

廠商性質：生產廠家

訪問量：1063

服務熱線

010-50973130

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產品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質羥自由基清除能力檢測植物銨態氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

產品介紹

肌酐（Cr）含量檢測試劑盒說明書（肌氨酸氧化酶法）

可見分光光度法

貨號：BC4910

規格：50T/48S

產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規格	保存條件
提取液一	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
提取液二	液體8 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	粉劑×2支	-20℃保存
試劑二	粉劑×2支	-20℃保存
試劑三	粉劑×2支	-20℃保存
試劑四	粉劑×1支	2-8℃保存
試劑五	粉劑×2瓶	-20℃保存
試劑六A液	液體10 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑六B液	液體10 mL×1瓶	2-8℃保存
標準品	粉劑×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前每支加入1.7 mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑-20℃分裝保存兩周。

2. 試劑二：臨用前每支加入1.65 mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑-20℃分裝保存兩周。

3. 試劑三：臨用前每支加入1 mL蒸餾水（50T/48S），充分溶解。為方便儲存故多給一支。用不完的試劑-20℃分裝保存兩周。

4. 試劑三工作液：根據試驗所需用量，按照試劑三：蒸餾水=1:9的比例，充分混勻，現配現用。

5. 試劑四：臨用前加入1 mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑-20℃分裝保存兩個月。

6. 試劑五：臨用前每瓶加入3.4 mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑-20℃分裝保存兩周。

7. 試劑六：臨用前根據實驗所需用量，按照試劑六A液：試劑六B液=1:1的比例，充分混勻，現用現配。

8. 標準品：1 mg肌酐。臨用前加入1 mL蒸餾水，充分溶解，即1 mg/mL標準儲備液，2-8℃保存1個月。臨用前取50μL和200μL蒸餾水混合配制成200μg/mL的標準溶液備用，現用現配。

產品說明：

肌酐（creatinine，Cr），化學式是C₄H₇N₃O，是肌肉在人體內代謝的產物，主要由腎小球濾過排出體外。血中肌酐來自外源性和內源性兩種，外源性肌酐是肉類食物在體內代謝后的產物；內源性肌酐是體內肌肉組織代謝的產物。

肌酐在肌酸酶的催化下肌酸水解生成肌氨酸和尿素，肌氨酸在肌氨酸氧化酶的催化下氧化產生過氧化氫。過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安*比林偶聯酚，生成有色化合物，在505nm 有特征吸收峰。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、低溫離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、超聲破碎儀。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

1、細菌、細胞樣本的制備：按照細胞數量（10⁴個）：提取液一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300W，超聲3秒，間隔9秒，總時間5 min）；于4℃，12000g離心10 min，取0.8 mL上清液，再加入0.15 mL提取液二，混勻，4℃，12000 g離心10 min后取上清待測。

2、組織樣本的制備：按照質量（g）：提取液一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1 g組織，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴勻漿后于4℃，12000 g離心10 min，取0.8 mL上清液，再加入0.15 mL提取液二，混勻，4℃，12000 g離心10 min后取上清待測。

3、血清（漿）：取100 μL血清（漿）加入1 mL提取液一，4℃，12000 g離心10 min，取0.8 mL上清液，再加入0.15 mL提取液二，混勻，4℃，12000 g離心10 min后取上清待測。

二、測定步驟

1、分光光度計預熱30 min以上，調節波長至505 nm，蒸餾水調零。

2、按下表步驟加樣：

試劑名稱（μL）	測定管	空白管	標準管
樣本	60	-	-
蒸餾水	-	60	-
標準液	-	-	60
試劑一	60	60	60
試劑二	60	60	60
試劑三工作液	15	15	15
試劑四	15	15	15
充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）條件下，反應10 min。
試劑五	120	120	120
試劑六	270	270	270
充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）條件下，顯色30 min。
蒸餾水	400	400	400
充分混勻。測定505 nm處的吸光度。分別記為A測定、A空白、A標準。ΔA測=A測定-A空白，ΔA標=A標準-A空白。

注：空白管只需做1-2次。

三、肌酐含量計算

1、計算公式

（1）按照蛋白濃度計算

肌酐含量（μg/mg prot）= C標×ΔA測÷ΔA標×V樣÷（V樣×Cpr）=200×ΔA測÷ΔA標÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

肌酐含量（μg/g 質量）= C標×ΔA測÷ΔA標×（V上清+V提取液二）÷（W×V上清÷V提取液一）

= 237.5×ΔA測÷ΔA標÷W

（3）按照細菌或細胞數量計算

肌酐含量（μg/10⁴ cell）= C標×ΔA測÷ΔA標×（V上清+V提取液二）÷（細胞數量×V上清÷V提取液一）

= 237.5×ΔA測÷ΔA標÷細胞數量

（4）按照血清（漿）體積計算

肌酐含量（μg/mL）= C標×ΔA測÷ΔA標×(V上清+V提取液二)÷ [V液體×V上清÷(V提取液一+V液體)]

= 2612.5×ΔA測÷ΔA標

C標：標準管濃度，200 μg/mL；V樣：加入樣本體積，60 μL=0.06 mL；V上清：提取時上清液體積，0.8 mL；V提取液一：加入提取液一體積，1 mL；V提取液二：加入提取液二體積，0.15 mL；W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；細胞數量：以10⁴計；V液體：液體樣本體積，0.1 mL。

注意事項：

1、提取液中含有蛋白沉淀劑，提取的上清液不能用于蛋白濃度的測定。若想要用蛋白濃度計算肌酐含量需要另取樣本，即取相同質量的組織、同等數目的細菌或細胞，用1.1875mLPBS（生理鹽水）勻漿；取相同體積的血清（漿），用1.206mLPBS（生理鹽水）勻漿（相當于提取步驟最終樣本上清液），用BCA法進行蛋白濃度測定。

2、如果測定吸光值超過標準管吸光值，建議用蒸餾水稀釋樣本后再進行測定。如果ΔA測定小于0.01，建議增大樣本量后再進行測定。

實驗實例：

1、取0.1g小鼠肌肉加入1mL提取液一進行勻漿研磨離心，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，離心取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測=A測定-A空白=0.159-0.016=0.143，ΔA標=A標準-A空白=0.373-0.016=0.357。按樣本質量計算含量得：肌酐含量（μg/g 質量）=237.5×ΔA測÷ΔA標÷W=951.3 μg/g 質量。

2、取100μL牛血清加入1mL提取液一，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，離心取上清，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測=A測定-A空白=0.095-0.079=0.079，ΔA標= A標準-A空白=0.373-0.016=0.357。按照液體體積計算含量得：肌酐含量（μg/mL）= 2612.5×ΔA測÷ΔA標=578 μg/mL血清。