儲(chǔ)存條件
2-8℃
中文名稱
β-1,3葡聚糖酶活性檢測糖代謝
有效期
6個(gè)月
單位
盒
英文名稱
β-1,3-glucanase(β-1,3-GA) Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S

產(chǎn)品型號：BC0360-50T/24S

更新時(shí)間：2024-07-09

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1651

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC0360
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體50 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	粉劑×2支	2-8℃保存
試劑二	液體42 mL×1瓶	2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品	粉劑×1支	2-8℃保存

溶液的配制：
試劑一：臨用前取1支加1.6 mL蒸餾水溶解，用不完的試劑2-8℃保存 4周；
標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg無水*糖。臨用前加入1 mL蒸餾水溶解，配制成10 mg/mL葡萄糖溶液備用，2-8℃保存2周。
產(chǎn)品說明：
β-1,3-GA( EC 3.2.1.39)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解。在植物染病或處于其他逆境條件下，可誘導(dǎo)細(xì)胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性測定廣泛應(yīng)用于植物病理和逆境生理研究。
β-1,3-GA水解昆布多糖，內(nèi)切β-1,3-葡萄糖苷鍵，產(chǎn)生還原末端，通過測定還原糖生成速率，來計(jì)算其酶活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
細(xì)菌或細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率200w超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；12000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

二、測定步驟

分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。
標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備：將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/mL。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表

序號	稀釋前濃度（mg/mL）	標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL）	蒸餾水體積（µL）	稀釋后濃度（mg/mL）
1	10	100	900	1
2	1	160	40	0.8
3	1	120	80	0.6
4	1	80	120	0.4
5	1	40	160	0.2

實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需100µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

樣本測定（在1.5mL EP 管中依次加入下列試劑）

試劑名稱（μL）	測定管	對照管	標(biāo)準(zhǔn)管	空白管
樣本	100	100	-	-
標(biāo)準(zhǔn)液	-	-	100	-
蒸餾水	-	100	100	200
試劑一	100	-	-	-
充分混勻，放入37℃水浴60min。
試劑二	600	600	600	600

充分混勻，沸水浴5min（蓋緊，防止水分散失），流水冷卻，540nm 處記錄各管吸光值A，ΔA=A 測定-A對照。每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對照管。標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需做1-2次。
如果吸光值大于2，可以用提取液對樣本稀釋后測定（計(jì)算公式乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)）。
三、β-1,3-GA活性計(jì)算
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管吸光度x（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）和濃度（y，mg/mL）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA帶入公式中計(jì)算出樣本中產(chǎn)生的還原糖的含量y值（mg/mL）。
2、β-1,3-GA活性計(jì)算：

按蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg組織蛋白每小時(shí)產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
β-1,3-GA活性 (U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)÷T=y÷Cpr

按樣本質(zhì)量計(jì)算

單位的定義：每g組織每小時(shí)產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
β-1,3-GA 活性(U/g 質(zhì)量)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)÷T=y÷W

按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌每小時(shí)產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
β-1,3-GA 活性(U/10⁴ cell)=( y×V1)÷(500×V1÷V2)÷T=0.002×y
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，60min=1h；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，萬。

相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

X Niu,Q Xu,W Wang,et al. The antifungal activity of a thaumatin-like protein from oyster Crassostrea gigas.

Invertebrate Survival Journal. June 2018;(IF0.967)
參考文獻(xiàn)：

Mohammadi M, Karr A L. Beta-1, 3-glucanase and chitinase activities in soybean root nodules[J]. Journal of plant physiology, 2002, 159(3): 245.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0360/BC0365 β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）活性檢測試劑盒
BC2550/BC2555 α-葡萄糖苷酶（α-GC）活性檢測試劑盒
BC2560/BC2565 β-葡萄糖苷酶（β-GC）活性檢測試劑盒
BC2570/BC2575 α-半乳糖苷酶（α-GAL）活性檢測試劑盒